人参皂苷Rh2对微管蛋白聚合-解聚动力学的影响

www.binso.cn 2016-12-05 来源:并搜
  李春雷 卿晨  昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650031  [摘要] 目的:研究人参皂苷Rh2对围观蛋白聚合—解聚

李春雷 卿晨

昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650031

[摘要] 目的:研究人参皂苷Rh2对围观蛋白聚合—解聚动力学的影响.方法:采用冷冻超速离心术从新鲜猪脑组织中提取/纯化微管蛋白;采用SDS-PAGE鉴定微管蛋白,同时用Bradford法检测微管蛋白的初始浓度;在37℃和4℃、350nm下检测微管蛋白聚合—解聚的功能活性。

以紫杉醇为阳性对照,采用浊度法和透射电镜术分别从微管蛋白聚合程度和形态学方面研究Rh2对微管蛋白聚合-解聚功能的影响。浊度法:在37℃、350nm条件下,通过微管蛋白溶液的吸光度变化,检测紫杉醇和Rh2对微管蛋白聚合—解聚的影响。微管蛋白反应体系包括微管蛋白3mg/ml、ATP1mmol/L、紫杉醇或Rh2 50mmol/L。透射电镜术:微管蛋白反应体系包括微管蛋白3mg/ml、甘油30%、ATP1mmol/L、紫杉醇或Rh2 50mmol/L分别置于10℃和37℃孵育30min,取少量微管蛋白用戊二醛固定、醋酸双氧铀染色,在透射电镜下观察紫杉醇或Rh2对微管蛋白的形态学影响。

结果:SDS-PAGE结果显示:提取的微管蛋白分子量在预计的55KD左右,蛋白初始浓度为8mg/ml;浊度法检测结果显示:在37℃和350nm条件下,正常微管蛋白的聚合—解聚功能活性正常,其“时间—吸光度(OD)值”曲线形状为“几”字形,当微管蛋白聚合—解聚达到平衡(反应体系OD值达稳态)时加入紫杉醇后,反应体系OD值快速上升并达到新的平衡,表明紫杉醇明显促进微管蛋白聚合。结合正常微管蛋白的功能活性检测结果,提示本实验体系可靠。加入Rh2后,微管蛋白反应体系OD值分别与正常和溶媒组OD值比较,其升高速度和达到稳态时的OD值明显升高。

投射电镜检测结果显示:10℃时微管蛋白在紫杉醇和Rh2作用下呈现网状形态,37℃时微管蛋白在紫杉醇和Rh2作用下呈现网状甚至可见中空管状结构,但正常微管蛋白仅在37℃时呈现网状形态,而在10℃时绝大多数微管蛋白呈离散短小棒状形态。结论:人参皂苷Rh2明显影响微管蛋白的聚合—解聚动力学平衡,促进微管蛋白的聚合,其作用与紫杉醇相似,具体的作用机制或作用位点有待深入研究。

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