HPLC法测定保健食品中人参皂苷Rh2 的含量

www.binso.cn 2016-12-05 来源:并搜
HPLC法测定保健食品中人参皂苷Rh2 的含量

[摘要] 目的:探讨高效液相色谱(HPLC)法测定保健食品中人参皂苷Rh2的含量。方法:采用C18色谱分析柱;流动相为乙腈:水=60: 40;紫外检测器(或二极管阵列检测器) ,检测波长203nm。结果:在0.05~5μg范围内, Rh2线性关系良好,相关系数r=0199999,平均回收率为9913%,平均标准偏差(RSD)为1.86%,最低检出限为1.8ng。结论:本方法简便、快速、可靠,能满足保健食品中Rh2含量测定的需要。

[关键词] HPLC;人参皂苷Rh2;测定

人参皂甙Rh2(学名22(S) - Proto- panaxadiol- 3- O-β- glucopyranoside) ,是人参中有效成分之一,其分子式为C36O8H62,分子量622.88。大量研究表明,人参皂甙Rh2 具有特定保健功能, 它是一种新近发现的抗肿瘤、抗转移的天然植物成分,化疗增效减毒的首选药物。近年来, 人参皂甙Rh2的功效已引起了大家的关注。对人参皂甙Rh2的检测现在还没有国标方法,目前主要采用的方法有:高效液相色谱法(紫外检测器、二极管阵列检测器、折光散射光检测器)、薄层层析法、高效液相色谱-质谱法等。薄层层析法分辨率和灵敏度较低,不能准确定量;质谱和折光散射光检测器灵敏度较高,但仪器的普及率较低。本文采用高效液相色谱法(紫外检测器或二极管阵列检测器) ,对人参皂甙Rh2的检测方法进行了摸索,方法准确、灵敏度高、重现性好,可作为保健食品中Rh2质量控制检测。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

岛津高效液相色谱仪配备SIL- 10ADvp自动进样器;LC- 10ATvp高压泵; SPD- 10Avp紫外- 可见光检测器, SPD-M10Avp二极管阵列检测器; 2200超声波清洗器。甲醇、乙腈为色谱纯;乙醇为分析纯;水为二蒸水;人参皂甙Rh2标准(中国药品生物制品检定所提供,111748- 200501)。

1.2 标准溶液配置

准确称取约5mg标准品(准确到0.01mg)于50ml容量瓶,加甲醇溶解定容,最后浓度约为0.100mg/ml。

1.3 样品处理

取20粒胶囊内容物研成粉末,并过20目筛;精确称取该粉末样适量于50ml容量瓶中,加甲醇适量于超声波清洗器中超声提取30min,取出,待溶液恢复常温后用甲醇定容,提取液过0.45μm滤膜供高效液相色谱分析。

1.4 色谱体检

色谱柱: HypersilODS2柱; 4.6mm×300mm, 5μm;紫外检测器(或二极管阵列检测器):检测波长203nm;流动相:乙腈:水=60: 40;柱温:室温;流量: 1.0ml/min。进样量: 1~50μl。

1.5 结果计算

样品中人参皂甙Rh2 含量通过外标法定量, 人参皂甙Rh2含量按以下公式计算:

R=C×V×D×100/M

式中:

R—样品中人参皂甙Rh2含量, g/100g

C—样品中待测组分的浓度, g/ml

M—检测样品取样量, g

V—样品溶液定溶体积, ml

D—样品溶液的稀释倍数

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器在190~800nm范围内对人参皂甙Rh2标准液进行扫描,其光谱图见图1,从图中看到, 人参皂甙Rh2在210~800nm范围内基本上没有紫外吸收,因此为消除溶剂及杂质的干犹,选择有紫外吸收较大的203nm为检测波长。标准及样品色谱图见图2、图3。

2.2 标准曲线及线性范围

分别取上述标准液0.5、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μl进样。以人参皂甙Rh2 标准含量Y对峰面积X作校正曲线,回归方程和线性相关系数分别为Y=1190×10-6X-9199×10- 3, r=0.99999,线性范围为0.05~5μg,检出限为1.8ng。

2.3 精密度和准确度试验

取同一份样品6份按照上述方法处理,进行测定,其相对标准偏差(RSD)为1.86%。在上述样品中分别加入高、中、低浓度标准液,其加标回收率见表1。

2.4 提取剂的选择

用不同比例的甲醇、乙醇、乙腈的水溶液作为提取剂分别对同一样品超声提取30min,提取结果见表2,从表中看出,甲醇的提取率最高,因此,本法选择甲醇为提取剂。

2.5 流动相的选择

实验分别用乙腈:水为10: 90、20: 80、30: 70、40: 60、50: 50、60: 40、70: 30、80: 20、90: 1作为流动相对样品进行分析,结果表明,乙腈:水=60: 40时,人参皂甙Rh2分离良好。以甲醇-水作为流动相也可获得较好的分离,但考虑到乙腈- 水作为流动相时柱压较低,利于柱子及系统的保护,因此选择乙腈:水=60: 40为流动相。

2.6 稳定性试验

取同一样品,分别于0、1、6、10、28、48h进行测定,检测结果分别为1.11、1.12、1.10、1.11|、1.11、1.10g/100g,其含量测定值RSD为0167%,这说明在48h内人参皂甙Rh2含量基本稳定。

2.7 提取时间选择

用甲醇作为提取剂,对同一样品分别用10、15、20、25、30、35、40min进行超声提取测定,其测定值分别为1.87、1.10、1.11、1.12、1.11、1.13g/100g,测定结果表明,在20min后,测定结果基本稳定,为保证不同样品的提取效果,本文采用30min超声提取。

2.8 样品测定

用本方法对3个不同批号的保健品进行了测定,测定结果分别为1.11、1.13、1.08g/100g。我们在以上色谱条件下,在样品中添加了人参皂甙标准品Re、Rg1、Rd,结果这些标准与样品中杂质重叠,均未干犹Rh2。在样品测定中,其Rh2 光谱图与标准光谱图相符。通过以上实验可见,用本法测定保健食品中人参皂甙Rh2 含量,简便、快速、准确,稳定性好,是测定人参皂甙Rh2较理想的方法。对于含有人参皂甙Rh2的保健品,可以通过二极管阵列检测器的光谱图,对峰纯度及定性进行判断,以减少实验误差。

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